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一個(gè)二化性家蠶醛酮還原酶基因的克隆及序列與表達(dá)分析
關(guān)鍵詞：醛酮還原酶 滯育準(zhǔn)備 家蠶 表達(dá)
摘要：醛酮還原酶(aldo-keto reductase,AKR)超級(jí)家族成員以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸作為其輔酶,將醛酮類化合物還原成相應(yīng)的醇類,其作用底物范圍廣泛,包括糖類、脂肪醛和甾體類激素等,在許多重要生物學(xué)反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。以二化性家蠶品系秋豐為材料,利用RT-PCR分別從滯育命運(yùn)組和非滯育命運(yùn)組克隆出AKR蛋白的cDNA序列。AKR蛋白序列由343個(gè)氨基酸組成,與黑腹果蠅和人的AKR分別有43%和38%的序列一致性。基于蛋白質(zhì)序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示,家蠶AKR蛋白屬于AKR2E亞家族,其氨基酸序列與該家族成員序列一致性超過(guò)30%,故命名為AKR2E-like。將akr2e-like基因的cDNA序列克隆進(jìn)表達(dá)載體pET-28a(+)中進(jìn)行原核重組表達(dá),SDS-PAGE電泳和Western blot分析顯示重組蛋白被成功表達(dá)。qRT-PCR分析表明,ark2e-like基因表達(dá)受發(fā)育環(huán)境調(diào)節(jié):在滯育誘導(dǎo)條件下,該基因在家蠶化蛹早期的表達(dá)量持續(xù)增加,在化蛹后第4天mRNA豐度達(dá)到最高值;而在非滯育誘導(dǎo)條件下,化蛹后ark2e-like基因表達(dá)量并無(wú)明顯波動(dòng)。上述結(jié)果表明,ark2e-like基因有可能在家蠶二化性品系的滯育準(zhǔn)備期起關(guān)鍵作用。
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