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尼羅羅非魚Galectin-3基因的原核表達與條件優化
關鍵詞：尼羅羅非魚 原核表達 條件優化
摘要：【目的】對Galectin-3蛋白進行純化,優化誘導相關表達條件,為大量獲取羅非魚Galectin-3蛋白提供方案?！痉椒ā扛鶕﨨CBI上已公布的羅非魚(Oreochromis mossambicus)Galectin-3基因序列,設計多對帶EcoRI和Xhol酶切位點的引物,篩選出良性擴增引物,對羅非魚cDNA經進行聚合酶鏈式反應(PCR)擴增、限制性快切酶雙酶切、T4連接酶連接等步驟,構建羅非魚Galectin-3基因的原核表達質粒pGEX-4T-Galectin-3,將重組質粒導入大腸桿菌BL21中,進行Galectin-3重組蛋白的表達。并比較不同的誘導溫度、誘導時間、IPTG濃度條件下的表達效果,對Galectin-3蛋白表達最優條件進行篩選。【結果】構建了羅非魚Galectin-3原核表達質粒,進行Galectin-3重組蛋白后發現37℃下,0.4mmol/L濃度的IPTG誘導5h即可誘導Galectin-3重組蛋白高效表達。免疫印跡結果顯示,經蛋白純化柱純化后的pGEX-4T-Galectin-3重組蛋白可與GST-Tag單克隆抗體發生特異性反應,進而表明表達的重組蛋白是羅非魚的Galectin-3蛋白。【結論】本研究成功構建了羅非魚Galectin-3基因的原核表達載體,并確定了Galectin-3融合蛋白最適的表達條件:37℃下,0.4mmol/L濃度的IPTG誘導5h。
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