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板栗CmWRKY基因的克隆、序列分析與原核表達
關鍵詞：板栗 cmwrky 基因克隆 序列分析 原核表達
摘要：為深入研究板栗WRKY轉錄因子基因在板栗抗病過程中的分子作用機制,根據板栗轉錄組數據庫分析獲得EST序列,利用RT-PCR技術,克隆板栗WRKY轉錄因子cDNA(CmWRKY)序列,分析CmWRKY基因及其編碼蛋白的相關信息并進行原核表達研究。結果表明,CmWRKY基因為1437bp,編碼479個氨基酸,推測蛋白分子質量為52.12896ku,理論等電點為9.15,具有2個WRKY保守結構域和2個C2H2鋅指結構域,屬于WRKY家族的第Ⅰ組,基因登錄號為KY312850.1。CmWRKY核苷酸序列與巴旦木等植物的WRKY基因一致性均在80%以上,與西班牙栓皮櫟WRKY基因一致性最高,達到97%。同源建模表明,CmWRKY蛋白三級結構與擬南芥AtWRKY1蛋白結構相似,推測其可能與AtWRKY1具有相似的調控功能。分子進化分析顯示,板栗CmWRKY與西班牙栓皮櫟及核桃WRKY蛋白親緣關系最近。SDS-PAGE蛋白電泳分析表明,CmWRKY蛋白最佳誘導表達條件為0.2mmol/LIPTG在30℃下誘導10h,蛋白分子質量為56ku,其主要以可溶性蛋白的形式存在。為板栗CmWRKY基因的生物學功能研究及應用奠定基礎。
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