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轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴增技術(shù)與real-time RT-PCR在人類免疫缺陷病毒檢測中的應(yīng)用
關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴增技術(shù) 人類免疫缺陷病毒 實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 線性回歸
摘要：目的：利用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴增技術(shù)（transcription mediated amplification,TMA）擴增HIV RNA,探討TMA技術(shù)擴增HIV RNA的敏感性及其與實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的比較。方法：利用Taq Man探針、特異性引物、鼠白血病反轉(zhuǎn)錄酶、T7-RNA聚合酶及PCR底物等建立TMA擴增體系。通過擴增一組10倍梯度稀釋的HIV RNA轉(zhuǎn)錄標準品,評價TMA體系的靈敏性。收集60例HIV感染患者的血漿,同時采用TMA試劑與Cobas Amplicor HIV-1 Monitor 1.5版試劑進行檢測,比較兩種方法的陽性檢出率,并利用線性回歸和Bland-Altman法分析兩種技術(shù)的相關(guān)性和一致性。結(jié)果：成功建立了TMA擴增體系,這種技術(shù)可以檢測低至10 copies/m L的HIV轉(zhuǎn)錄標準品。60份HIV感染者血漿樣本中,TMA及Cobas均檢測到陽性46份,均陰性12份,TMA檢測陰性而Cobas檢測陽性樣本2份,檢測一致率為96.7%。兩種技術(shù)陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P〉0.05）。對其中46份TMA檢測和Cobas檢測均有定量結(jié)果的血漿進行線性回歸分析,兩種技術(shù)有非常好的相關(guān)性（r=0.997,P〈0.001）。Bland-Altman分析顯示兩種檢測方法定量Lg差值平均值為0.02,44份（95.7%）樣本在95%的一致性界限內(nèi)。結(jié)論：TMA技術(shù)具有高靈敏性潛能。TMA與real-time RT-PCR檢測血漿中HIV RNA具有非常好的相關(guān)性與一致性。
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