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結合區部分缺失的纖維素酶基因的克隆與表達及酶學性質初步測定
還萍; 李銳; 李華南; 江正兵; 馬向東 湖北大學生命科學學院; 生物催化與酶工程國家重點實驗室; 湖北武漢430062
關鍵詞：內切纖維素酶 異源表達 結合區 酶學性質
摘要：從梧桐腐枝上分離到一株可降解纖維素的細菌菌株,發現克隆于該菌株的內切纖維素酶基因(egt)結合區部分缺失(8 bp),導致移碼并提前終止,全長1 146 bp,編碼381個氨基酸,分子量為40.06 kD.克隆含有完整結合區的基因(eg),通過酶學性質研究,表明兩者均僅具有羧甲基纖維素鈉活性,纖維素酶EGT和EG的最適反應溫度分別為45 ℃和55 ℃,EGT更加耐高溫.最適pH均為7.0,都具有較好的pH穩定性. Mn^2+、Fe^2+對兩者具有激活作用,Zn^2+、Ca^2+、K ^+、NH4^2+ 和Mn^2+對其都具有抑制作用.EGT的 K m=3.09 mg/mL,比酶活為98.4 U/mg;EG的 K m=8.654 mg/mL,比酶活為53.53 U/mg. EGT結合區的部分缺失導致酶與底物的親和能力更好,同時比酶活提高183%,水解能力更強.
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