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重組人溶菌酶在畢赤酵母中的誘導表達及活性研究
李浩杰; 楊雪珍; 藍文康; 張偉崇; 王曄; 何蘭花; 林樹茂; 劉燊; 張輝華 佛山科學技術學院生命科學與工程學院; 廣東佛山528000
關鍵詞：人溶菌酶 重組蛋白 畢赤酵母 誘導表達 生物活性
摘要：為了構建一種胞內表達人溶菌酶(hLZ)的畢赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通過酶切位點插入畢赤酵母表達載體pPICZαA,獲得pPICZαA-hLZ。線性化該表達載體,電轉化并篩選陽性克隆,甲醇誘導重組蛋白表達后,進行純化和活性分析。結果表明,通過親和層析樹脂(Ni-IDA)從培養液上清純化目標蛋白,SDS-PAGE表明目標蛋白為14.7kDa左右,Western-blot結果表明目標蛋白即為帶有6個His標簽的重組人溶菌酶,BCA法測定表明純化后的蛋白濃度為0.121mg/mL;溶壁微球菌抑菌試驗表明該重組人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地獲得了胞內表達且具有部分生物活性的人溶菌酶畢赤酵母工程菌,為重組人溶菌酶作為飼料添加劑開發應用奠定了一定的基礎。
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