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雜交鮑染色體GISH的優(yōu)化
關(guān)鍵詞：雜交鮑 染色體
摘要：基因組熒光原位雜交(GISH)是分析遠(yuǎn)緣雜交染色體組結(jié)構(gòu)的有力工具。為了提高雜交鮑GISH的信號(hào)強(qiáng)度,以皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai)和雜色鮑(H.diversicolor)雜交子代為研究對(duì)象,研究了雜交緩沖液中探針質(zhì)量濃度、封阻DNA質(zhì)量濃度,以及去離子甲酰胺、硫酸葡聚糖或聚乙二醇6000的含量對(duì)GISH 信號(hào)強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明,雜交緩沖液中,探針質(zhì)量濃度應(yīng)大于6.25 ng/μL,封阻DNA(鮭精DNA)的適宜質(zhì)量濃度約為探針的10倍,去離子甲酰胺的適宜體積分?jǐn)?shù)約為30%,硫酸葡聚糖的適宜體積分?jǐn)?shù)為12.5%~17.5%。此外,用7.5%的聚乙二醇6000替代硫酸葡聚糖可以提高雜交信號(hào),但存在信號(hào)噪點(diǎn)多等問題。
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