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水稻高鹽脅迫下的酵母雙雜交文庫構建及OsRPK1胞內互作蛋白質的篩選
鄒禹; 劉園園; 錢寶云; 占新春; 鄭樂婭; 張煒; 張培江 安徽省農業科學院水稻研究所; 安徽合肥210031; 南京農業大學生命科學學院; 江蘇南京210095
關鍵詞：水稻 osrpk1 高鹽脅迫 酵母雙雜交cdna文庫
摘要：為了挖掘水稻OsRPK1胞內互作蛋白質,闡明OsRPK1參與高鹽脅迫的分子機制,本研究利用SMART技術,構建水稻高鹽脅迫下根尖的酵母雙雜交文庫。PCR擴增獲得OsRPK1基因編碼胞內區域的堿基序列,構建誘餌表達載體(pGBKT7-OsRPK1-CD),檢測誘餌表達載體在酵母中的毒性和自激活活性,篩選OsRPK1胞內互作蛋白,進一步分析高鹽脅迫下候選基因的表達模式。結果表明,構建的cDNA文庫庫容量為1.11×10~7 CFU,文庫重組率為96%,文庫插入片段多態性較好。成功構建了誘餌表達載體(pGBKT7-OsRPK1-CD),經檢測誘餌表達載體無毒性,無自激活活性。誘餌表達載體與cDNA文庫進行雙雜交篩選,經測序和比對分析獲得了11個重要的候選基因,檢測候選基因在高鹽處理下的表達情況,其中8個候選基因受高鹽誘導表達,2個候選基因受高鹽脅迫抑制表達,1個候選基因受高鹽脅迫瞬時誘導表達后表達量又受到顯著抑制。
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