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基于熒光素酶報告基因的細菌外膜囊泡標記方法的建立

劉暢; 李楚楚; 李智洋 南京鼓樓醫院檢驗科; 南京210008; 江蘇省疾病預防控制中心急性傳染病防制所; 南京210009

關鍵詞:細菌外膜囊泡 外膜蛋白 熒光素酶 

摘要:目的建立一種基于熒光素酶報告基因的細菌外膜囊泡標記方法。方法利用細菌外膜囊泡表面攜帶高豐度細菌外膜蛋白A(OmpA)的特點,構建OmpA-NanoLuc熒光素酶融合蛋白,根據熒光素酶活性評估樣品中的細菌外膜囊泡數量。結果成功構建OmpA-NanoLuc融合蛋白表達載體,受試菌株在表達該融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有穩定的熒光素酶活性。可通過檢測熒光素酶活性的方式對細菌外膜囊泡進行半定量檢測。結論建立了一種基于熒光素酶標記的細菌外膜囊泡半定量檢測方法,可用于評估特定菌株的細胞外膜囊泡分泌水平。

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