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樣品前處理對牛精子全蛋白質組鑒定的影響
關鍵詞：牛精子 蛋白質組學 樣品前處理 蛋白質提取液 酶解方法
摘要：本文主要分析樣品前處理對牛精子全蛋白質組鑒定的影響,文中對5種不同的蛋白質提取液和3種不同的酶解方法進行了系統地分析比較.5種蛋白質提取液:溶液BS(4%SDS,0.1mol/L Tris-HCl,0.1mol/L DTT);溶液BU(8mol/L Urea,0.1mol/L Tris-HCl);溶液BT(7mol/L Urea,2mol/L Thiourea,0.1mol/L Tris-HCl,0.4%Chaps);溶液BR(購自Thermo,貨號89901);溶液BD(2%SDC,50mmol/L NH4HCO3,25mmol/L NaCl).3種酶解方法:溶液內酶解、膠內酶解以及膜上酶解(FASP).實驗結果顯示:牛精子蛋白質提取能力BS最強,BU最弱;BT、BR以及BD相當.BS-FASP不適用于牛精子蛋白質組學研究.膠內酶解鑒定到的蛋白質均多于FASP法,但是膠內酶解操作過程復雜繁瑣,耗時長.基于BD的溶液內酶解法鑒定到的蛋白質數量最多,膜蛋白提取鑒定能力較強,且操作時間最短,是較為理想的方法.
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