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人源抗狂犬病病毒單克隆抗體的構(gòu)建及驗(yàn)證
關(guān)鍵詞：狂犬病病毒 單克隆抗體 噬菌體抗體庫(kù) 快速熒光灶抑制試驗(yàn)
摘要：目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌體抗體庫(kù),構(gòu)建單克隆抗體(單抗)輕、重鏈質(zhì)粒,瞬時(shí)表達(dá),純化后驗(yàn)證具有高中和活性的單抗。方法以從ScFv噬菌體抗體庫(kù)中篩選獲得特異性抗體為模板,PCR擴(kuò)增抗體輕、重鏈可變區(qū)序列,構(gòu)建人源全分子抗體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒;輕、重鏈質(zhì)粒混合后轉(zhuǎn)染HEK293 EBNA1細(xì)胞,瞬時(shí)表達(dá)全分子抗體。采用Mabselect SuRe介質(zhì)手動(dòng)親和純化抗體,Nano Vue超微量分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度,快速熒光灶抑制試驗(yàn)(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)進(jìn)行體外中和效價(jià)驗(yàn)證。結(jié)果成功構(gòu)建22個(gè)輕鏈質(zhì)粒,15個(gè)重鏈質(zhì)粒。通過(guò)真核細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)后,經(jīng)手動(dòng)親和純化后,獲得22株單抗。除1株抗體外,其余21株抗體的蛋白質(zhì)量濃度均>300μg/mL;部分抗體純度均在90%以上。中和活性結(jié)果顯示,5株在1 500~1 800 IU/mg之間;8株在800~1 500 IU/mg之間;7株在500~800 IU/mg之間;其余2株在500 IU/mg以下。結(jié)論成功構(gòu)建并驗(yàn)證獲得20株中和活性>500 IU/mg的人源抗狂犬病病毒單抗,為單抗混合制劑的研究奠定了基礎(chǔ)。
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