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2017年湖北省襄陽市手足口病患者柯薩奇病毒A2型分離株的突變和重組分析
關鍵詞：手足口病 柯薩奇病毒a2型 vp1基因特征 重組分析
摘要：目的通過對2016-2017年襄陽市手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)樣品的分離與鑒定,了解主要病原之一的柯薩奇病毒A2型(Coxsackievirus, CV-A2)的分子生物學特征。方法收集2016年9月-2017年12月襄陽市HFMD患兒肛拭子樣品,用人類橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞)培養(yǎng),分離病毒。RT-PCR擴增CV-A2 VP1基因,Megalign軟件分析VP1基因同源性,MEGA6軟件構建系統(tǒng)發(fā)育樹。比較3種疾病(急性遲緩性麻痹、手足口病和急性呼吸道感染)CV-A2分離株VP1氨基酸序列,分析可能的致病位點。擴增CV-A2代表株基因組全長序列,用SimPlot軟件分析可能的重組事件。結果 2016-2017年CV-A2襄陽株之間VP1核苷酸及氨基酸同源性分別為96.4%~99.8%,98.0%~100.0%;襄陽株與CV-A2原型株(Fleetwood株)之間的核苷酸及氨基酸同源性分別為80.8%~81.9%,95.3%~95.9%。與襄陽株同源性最高的為2017年江西株(GenBank:MG926784),核苷酸及氨基酸同源性分別為96.7%~98.8%,98.0%~98.6%。襄陽市HFMD主要病原之一的CV-A2 VP1基因系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,襄陽株與國內主要流行株同屬于基因型D。3種疾病分離株的VP1氨基酸比對發(fā)現(xiàn),急性遲緩性麻痹分離株和HFMD分離株在第21、60、82和215位存在差異;而HFMD分離株與呼吸道感染分離株之間只在167位存在差異,由谷氨酸變成天冬氨酸。CV-A2重組分析提示,襄陽株在P1區(qū)域與Fleetwood株同屬一分支,在P2區(qū)域與CV-A5 Swartz株親緣性最高,但在P3區(qū)域與CV-A16 G-10株有較高的相似度。結論雖然CV-A2襄陽株與其他流行株在VP1區(qū)序列上親緣性較高,但其VP1氨基酸突變或與其他腸道病毒的型間重組可能導致其致病特性與流行病學特點發(fā)生變化。
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