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3種龍血樹PAL基因克隆及分子鑒定
關鍵詞：龍血樹 龍血竭 苯丙氨酸解氨酶 基因克隆 基源鑒定
摘要：該研究以3種龍血樹(劍葉龍血樹、海南龍血樹和巖棕)的DNA和總RNA為模板,采用同源克隆法克隆龍血竭3種基源植物的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase)基因PAL,利用DNAMAN、MEGA7等軟件進行生物信息學分析,以探討龍血竭3種基源植物的分子鑒定方法,為生產實際中對不同來源的龍血竭原料的鑒定提供理論依據。結果表明:(1)在龍血竭3種基源植物中分別獲得長度為718 bp的PAL片段,序列分析發現,3種龍血樹PAL片段高度一致(99.69%),僅存在5處堿基突變;系統進化分析表明,龍血樹PAL片段與百合科植物PAL基因聚為一類。(2)RT-PCR分析發現,PAL基因在3種龍血樹的根、莖、葉中均有表達,同種龍血樹不同組織的表達量差異較小,且PAL基因在巖棕中的表達量較高,在劍葉龍血樹和海南龍血樹中表達量較低。(3)利用保守引物進行分子鑒定發現,同種龍血樹PAL序列一致,3種龍血樹PAL片段存在5處堿基突變,且這些堿基突變為穩定遺傳,表明3種龍血樹PAL基因高度保守。(4)根據突變位點建立了龍血竭3種基源植物的分子鑒定方法,進一步分子鑒定結果表明,劍葉龍血樹的堿基位置為GCGGG,海南龍血樹的堿基位置為CTGGC,巖棕的堿基位置為GTTTG。該研究結果為龍血竭原材料溯源和質量控制奠定了理論與技術基礎。
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