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HPLC-FLD法測定歐前胡素對腫瘤耐藥細胞懸液中羅丹明123含量的影響
關鍵詞：歐前胡素 腫瘤
摘要：目的:建立高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-FLD)測定腫瘤耐藥細胞中羅丹明123(Rho 123)的濃度,并采用建立的檢測方法考察歐前胡素對Rho 123含量的影響。方法:用乙腈沉淀法進行蛋白沉淀。色譜柱為Phenomenex-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱溫為40℃,流動相為乙腈-1%三乙胺(磷酸調(diào)至p H為3.0()28∶72),流速為1 mL·min-1,激發(fā)波長485 nm,發(fā)射波長546 nm,進樣量為20μL。結(jié)果:Rho 123標準曲線為Y=1.199 3X-4.003 6(R2=0.999 7),其質(zhì)量濃度在9.375~600 ng·mL-1范圍內(nèi)線性良好,定量下限為1.172 ng·mL-1,日內(nèi)與日間精密度均小于10%,絕對回收率為70.6%~80.6%,相對回收率為91.0%~106.7%,長期、短期以及反復凍融穩(wěn)定性良好。2、5、10μg·mL-1歐前胡素組的A2780/Taxol與K562/ADR細胞內(nèi)的蓄積倍數(shù)分別為2.79、3.53、4.18與2.18、2.36、2.39。結(jié)論:本方法專屬性強,靈敏度高,簡單可靠,適用于檢測腫瘤耐藥細胞懸液中Rho 123的濃度,可用于細胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的活性和功能評價。歐前胡素對腫瘤耐藥細胞中P-gp介導的Rho 123外排具有抑制作用。
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