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銅綠假單胞菌溶血素共調節蛋白的表達純化及抗血清的制備
關鍵詞：銅綠假單胞菌 溶血素共調節蛋白 蛋白純化 抗血清
摘要：目的純化銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)溶血素共調節蛋白(Hemolysin co-regulated protein,Hcp)并制備抗血清。方法從NCBI網站查到銅綠假單胞菌Hcp蛋白序列,采用Signal IP 4.1預測定位及信號肽情況;登錄Swiss model網站預測三級結構情況;登錄www.iedb.org網站預測其B細胞表位。根據Hcp基因序列設計特異性引物,以銅綠假單胞菌基因組DNA為模板,PCR擴增Hcp基因,經雙酶切后連到pET28a。將重組質粒pET28a-Hcp轉化大腸埃希菌BL21(DE3),然后用IPTG誘導重組Hcp蛋白表達。使用鎳柱親和層析法純化目的蛋白。用Hcp蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法檢測抗血清效價。結果 Hcp定位在細菌細胞漿,無信號肽,6個單體蛋白組成一個環狀的中空結構,含有多個B細胞表位。構建的表達質粒pET28a-Hcp能表達23.9×10~3大小的Hcp蛋白,鎳柱層析后得到高純度的Hcp蛋白,重組Hcp蛋白誘導的抗體效價大于1∶10 240。結論成功重組表達銅綠假單胞菌Hcp蛋白及高滴度的抗血清,為研究Hcp的功能奠定了實驗基礎。
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