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棉花DNA甲基轉(zhuǎn)移酶GhDMT9抗逆性分析
關(guān)鍵詞：陸地棉 ghdmt9 生物信息學(xué)分析 vigs沉默 超表達(dá)
摘要：為探究GhDMT9基因的功能,深入了解DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在植物表觀遺傳方面的作用及其作用機(jī)制,利用PCR技術(shù)從陸地棉TM-1中克隆GhDMT9基因,構(gòu)建pYL156:GhDMT9VIGS沉默載體并侵染棉花;構(gòu)建PBI121:GhDMT9過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染擬南芥。生物信息學(xué)分析結(jié)果為:GhDMT9蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量為57691.44kDa,等電點(diǎn)為5.45,總平均親水性是-0.359,不存在跨膜結(jié)構(gòu)域。GhDMT9是一種具有親水能力的酸性穩(wěn)定蛋白,不是分泌型蛋白,不能在細(xì)胞中發(fā)生遷移。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示含有α螺旋(29.61%)、無規(guī)則卷曲(45.29%)、延伸鏈(19.22%)、β-轉(zhuǎn)角(5.88%)。干旱和鹽脅迫處理VIGS沉默GhDMT9基因的棉花幼苗出現(xiàn)明顯的表型差異。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的表達(dá)模式分析結(jié)果表明:干旱和鹽脅迫處理pYL156:GhDMT9侵染過的棉花與對(duì)照相比,GhDMT9的轉(zhuǎn)錄水平明顯降低。干旱和鹽處理轉(zhuǎn)GhDMT9基因的擬南芥T3代幼苗葉片失水、發(fā)黃、長(zhǎng)勢(shì)較弱。棉花幼苗沉默GhDMT9基因后與對(duì)照相比耐鹽性降低,過表達(dá)GhDMT9基因的擬南芥與野生型的擬南芥相比耐鹽性降低。上述結(jié)果表明GhDMT9基因在棉花響應(yīng)脅迫過程中發(fā)揮重要作用,為進(jìn)一步研究棉花的抗逆機(jī)制,挖掘功能基因奠定基礎(chǔ)。
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