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人IgE Fc原核表達載體的構建、表達、純化及對肥大細胞脫顆粒的抑制作用
李雪飛; 陸海濤; 劉利君; 楊寧; 馬麗娜; 吳景良; 牛艷東; 段昕所 承德醫學院附屬醫院; 河北承德067000
關鍵詞：ige fc 肥大細胞脫顆 原核載體構建 表達
摘要：目的探討人IgE Fc原核表達載體的構建、表達、純化及對肥大細胞脫顆粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表達載體為模版,用聚合酶鏈反應(PCR)方法擴增IgE Fc編碼序列,通過鎳柱親和層析進一步純化獲得的蛋白質,采取酶聯免疫吸附試驗檢測致敏肥大細胞中β-己糖胺酶和細胞因子。結果致敏肥大細胞中,抗原蛋白的表現形式主要是以涵體的模式存在且被成功純化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3細胞后,RBL-2H3細胞的細胞膜平滑,細胞緊密貼覆于細胞壁,形態為梭形。結論pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大細胞的脫顆粒,但不會對致敏肥大細胞活性造成影響,為人IgE Fc和哮喘等過敏性疾病研究提供了理論基礎。
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