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模擬微重力誘導(dǎo)小鼠成骨細(xì)胞微絲變化對堿性磷酸酶及骨鈣蛋白的影響
關(guān)鍵詞：失重模擬 成骨細(xì)胞 細(xì)胞骨架 堿性磷酸酶 骨鈣素
摘要：目的 研究模擬微重力誘導(dǎo)小鼠成骨細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)改變對堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨鈣蛋白（osteocalcin,OCN）的影響,探討失重導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的機(jī)制.方法本研究以已建株的小鼠成骨樣細(xì)胞株（MC3T3-E1）作為對象,以回轉(zhuǎn)器模擬微重力效應(yīng).實驗將細(xì)胞分為4組：模擬微重力組、0.5 μg/ml細(xì)胞松弛素B組、模擬微重力＋0.5 μg/ml細(xì)胞松弛素B組及正常重力組（對照組）.培養(yǎng)48 h后,利用異硫氰酸熒光素鬼筆環(huán)肽（fluoresceine isothiocyanate phalloidin,FITC-phalloidin）進(jìn)行免疫熒光染色,在激光共聚焦顯微鏡下觀察各組細(xì)胞微絲的變化;同時用ALP試劑檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)ALP的酶活性,采用ELISA法檢測各組細(xì)胞裂解液中OCN的表達(dá)量.結(jié)果 除正常重力組外,其余各組細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)都出現(xiàn)了不同程度的解聚,張力纖維減少,失去方向性,以模擬微重力＋0.5 μg/ml細(xì)胞松弛素B組改變最為明顯.和正常重力組比較,其余各組ALP的酶活性和OCN的表達(dá)量均成下降趨勢（F=17.23、121.91,P〈0.01）,且模擬微重力＋0.5 μg/ml細(xì)胞松弛素B組與模擬微重力組和0.5 μg/ml細(xì)胞松弛素B組這兩組之間的差別都有統(tǒng)計學(xué)意義（P〈0.05）.結(jié)論 微重力影響成骨細(xì)胞ALP的酶活性及OCN的表達(dá)可能與微重力誘導(dǎo)細(xì)胞骨架微絲解聚相關(guān).
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