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草酸鈣結石晶體對人近曲腎小管上皮細胞蛋白質表達譜的影響
關鍵詞：草酸鈣結晶 腎結石 蛋白質表達譜 腎上皮細胞 聚類分析
摘要：目的探討腎結石草酸鈣晶體對人近曲腎小管上皮細胞蛋白質表達譜的影響,篩選差異表達蛋白質并初步探討腎結石與腎損傷的關系。方法選取臨床經結石成分分析為草酸鈣的腎結石標本,充分研磨后配制草酸鈣晶體懸液,處理人近曲腎小管上皮細胞HK-2,提取總蛋白并通過SDS-PAGE對蛋白質量進行鑒定,通過BCA法測定蛋白濃度,然后通過TMT標記定量蛋白質組學分析法篩選實驗組和對照組蛋白質表達譜的差異,最后通過生物信息學的方法進行聚類分析、GO富集分析以及差異基因相關的蛋白質相互作用網絡分析。結果草酸鈣晶體對HK-2細胞顯示出明顯的細胞毒性,細胞生長速度減慢且引起細胞形態以及培養基PH值發生顯著改變。TMT標記定量蛋白質組學分析結果顯示經草酸鈣晶體處理后的HK-2細胞中差異表達的蛋白分子共1 141個,其中上調表達的699個,下調表達的442個。生物信息學分析結果提示這些差異蛋白在細胞外復合體、細胞器以及多種細胞學過程中發揮重要作用;差異蛋白共表達網絡分析發現在細胞骨架維持(ACTB,CFL1)和細胞特殊功能如分泌和加帽中起作用的蛋白(MYH9,MYH14)關系最為密切。結論草酸鈣結晶對人腎上皮細胞蛋白質表達有顯著影響,并且這些差異表達的蛋白質分子可能與腎結石的形成以及腎損傷有關。
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